MIF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400574-ACT

Il fattore inibitorio della migrazione dei macrofagi (MIF) è una citochina umana pleiotropica con attività di tautomerasi che regola le risposte immunitarie innate e adattative, la sopravvivenza cellulare e la segnalazione da stress. Agisce attraverso recettori tra cui CD74, con co-recettori come CXCR2/CXCR4, attivando a valle le vie MAPK/ERK, PI3K/AKT e NF-κB per modulare l’espressione genica infiammatoria e il reclutamento dei leucociti. MIF interagisce inoltre con la segnalazione dei glucocorticoidi e con l’omeostasi redox, influenzando la polarizzazione dei macrofagi, i programmi angiogenici e la dinamica del microambiente tumorale–immunitario. Un’espressione deregolata di MIF è stata associata a disturbi infiammatori cronici, fibrosi e processi correlati al cancro, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione immunitaria e delle reti di segnalazione rilevanti per la malattia.

MIF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MIF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MIF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MIF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MIF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MIF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MIF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MIF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MIF nelle cellule tumorali con espressione di MIF silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.