MFG-E8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421639

Panoramica

Mfge8 codifica la milk fat globule-EGF factor 8 (MFG-E8), una glicoproteina secreta che fa da ponte tra la fosfatidilserina esposta sulle cellule apoptotiche e integrine quali ITGAV/ITGB3 e ITGAV/ITGB5 sui fagociti, promuovendo l’efferocitosi e limitando la necrosi secondaria. Attraverso questa attività simile all’opsonizzazione, MFG-E8 influenza l’omeostasi immunitaria, la risoluzione dell’infiammazione e il rimodellamento tissutale, con effetti a valle sulla segnalazione citochinica e sugli stati di attivazione dei macrofagi. Nei sistemi murini, un’alterata funzione di Mfge8 è stata associata a una rimozione deregolata delle cellule morenti, a fenotipi infiammatori cronici e a risposte riparative compromesse in contesti vascolari, metabolici e neuroinfiammatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MFG-E8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mfge8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mfge8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mfge8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MFG-E8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mfge8 per lo studio della segnalazione di MFG-E8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mfge8 critici per la funzione di MFG-E8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mfge8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MFG-E8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MFG-E8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mfge8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MFG-E8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MFG-E8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mfge8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mfge8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.