Med10 Plasmide Double Nickase (h): sc-407658-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Med10 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Med10 Double Nickase Plasmid (h) e il Med10 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MED10. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Med10 Antibody (C-2): sc-393450
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Med10 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407658-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Med10 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407658-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MED10 codifica una subunità del complesso Mediator, un coordinatore centrale della trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II che collega i fattori di trascrizione specifici di sequenza al macchinario trascrizionale di base. Med10 contribuisce all’assemblaggio e alla stabilità dei moduli del Mediator che regolano l’avvio della trascrizione e i programmi di espressione genica dipendenti dai segnali. Attraverso questi ruoli, MED10 influenza ampi processi cellulari, tra cui proliferazione, differenziamento e reti trascrizionali responsabili allo stress. La disregolazione dei componenti del Mediator è associata a un controllo trascrizionale alterato nei disturbi dello sviluppo e a firme di espressione genica rilevanti per il cancro, rendendo MED10 un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione trascrizionale.
Med10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MED10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MED10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MED10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MED10 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.