MCT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400363-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MCT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MCT1 Double Nickase Plasmid (h) e il MCT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC16A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MCT1 Antibody (H-1): sc-365501
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MCT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400363-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCT1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400363-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC16A1 codifica il trasportatore di monocarbossilati 1 (MCT1), un simportatore di membrana plasmatica accoppiato ai protoni che media il trasporto bidirezionale di lattato, piruvato e corpi chetonici attraverso la membrana cellulare. Accoppiando il flusso dei monocarbossilati ai gradienti di protoni, MCT1 regola il pH intracellulare, l’equilibrio redox e il dialogo metabolico tra cellule glicolitiche e ossidative, influenzando vie quali la glicolisi, la fosforilazione ossidativa e l’adattamento metabolico associato all’ipossia. La funzione di MCT1 è integrata con il traffico e la stabilizzazione in membrana dipendenti da chaperoni (ad es. CD147/BSG), con effetti sulla disponibilità dei substrati e sulla segnalazione in tessuti metabolicamente attivi. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di SLC16A1 sono state associate a una gestione disfunzionale del lattato e del metabolismo energetico in ambito oncologico, nella fisiologia del muscolo scheletrico e in contesti neurologici, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul riprogramming metabolico.
MCT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC16A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC16A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC16A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC16A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.