Mcl-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421589-ACT

Il gene murino **Mcl1** codifica **Mcl-1**, una proteina anti-apoptotica della famiglia **BCL-2** che preserva l’integrità della membrana esterna mitocondriale sequestrando i fattori **BH3-only** pro-morte e limitando l’attivazione di **BAX/BAK**. La sua abbondanza è controllata in modo rigoroso dalla segnalazione dei fattori di crescita, dalle risposte allo stress e dal turnover proteasomiale, collocando Mcl-1 come un nodo a risposta rapida nell’apoptosi intrinseca. Mcl-1 interagisce inoltre con programmi cellulari che includono il metabolismo mitocondriale, la progressione del ciclo cellulare e la sopravvivenza a valle di vie quali **PI3K–AKT** e **MAPK/ERK**. Un’espressione deregolata di **Mcl1** è frequentemente associata a soglie apoptotiche alterate che contribuiscono a una sopravvivenza cellulare anomala nella biologia dei tumori e a fenotipi di sopravvivenza nelle linee immunitarie ed ematopoietiche, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sull’adattamento allo stress e sul destino cellulare.

Mcl-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mcl1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mcl-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mcl1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mcl1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mcl-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mcl1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mcl-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mcl-1 nelle cellule tumorali con espressione di Mcl1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.