MAVS Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400769-ACT

MAVS (proteina mitocondriale di segnalazione antivirale) è un adattatore ancorato ai mitocondri che trasmette il rilevamento dei virus a RNA da parte di RIG-I (DDX58) e MDA5 (IFIH1) ai segnali a valle dell’immunità innata. Una volta attivata, MAVS nuclea assemblaggi di tipo prionico che reclutano adattatori della famiglia TRAF e attivano i complessi TBK1/IKK, innescando i programmi trascrizionali mediati da IRF3/IRF7 e NF-κB. Questa via induce interferoni di tipo I e citochine infiammatorie che modulano la restrizione antivirale, l’immunometabolismo e le risposte di morte cellulare programmata. Una segnalazione MAVS deregolata è stata implicata in firme interferoniche aberranti e infiammazione cronica, ed è spesso studiata nel contesto dei meccanismi di evasione immunitaria virale.

MAVS Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAVS senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAVS Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAVS nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAVS, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAVS. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAVS nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAVS nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAVS nelle cellule tumorali con espressione di MAVS silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.