Plásmido CRISPR de Activación (h) MAVS: sc-400769-ACT

MAVS (proteína de señalización antiviral mitocondrial) es un adaptador anclado a la mitocondria que transmite la detección de virus de ARN por RIG-I (DDX58) y MDA5 (IFIH1) hacia las vías de señalización posteriores de la inmunidad innata. Tras su activación, MAVS nuclea ensamblajes tipo prión que reclutan adaptadores de la familia TRAF y activan complejos TBK1/IKK, impulsando los programas transcripcionales de IRF3/IRF7 y NF-κB. Esta vía induce interferones de tipo I y citocinas inflamatorias que modulan la restricción antiviral, el inmunometabolismo y las respuestas de muerte celular programada. La desregulación de la señalización de MAVS se ha implicado en firmas de interferón aberrantes e inflamación crónica, y se estudia con frecuencia en el contexto de los mecanismos de evasión inmunitaria de los virus.

MAVS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAVS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAVS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAVS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAVS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAVS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAVS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAVS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAVS en células tumorales con expresión de MAVS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.