MASP-1/3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421564

Panoramica

Masp1 codifica le proteasi seriniche associate alla lectina legante il mannosio (mannose-binding lectin–associated serine proteases) MASP-1 e MASP-3, enzimi secreti che partecipano all’immunità innata regolando la via lectinica del complemento. Attraverso la scissione di componenti del complemento e il coordinamento con molecole di riconoscimento dei pattern come MBL e le ficoline, MASP-1/3 influenza l’opsonizzazione, la segnalazione infiammatoria e il crosstalk tra il complemento e i processi correlati alla coagulazione. MASP-3 è inoltre collegata al controllo della via alternativa tramite l’attivazione del fattore D, collocando Masp1 in un punto d’intersezione chiave dell’amplificazione del complemento. L’attivazione disregolata del complemento e l’alterata attività di MASP-1/3 sono state associate a fenotipi infiammatori e autoimmuni e contribuiscono a meccanismi di danno tissutale rilevanti per la malattia in molteplici sistemi d’organo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MASP-1/3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Masp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Masp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Masp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MASP-1/3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Masp1 per lo studio della segnalazione di MASP-1/3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Masp1 critici per la funzione di MASP-1/3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Masp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MASP-1/3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MASP-1/3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Masp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MASP-1/3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MASP-1/3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Masp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Masp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.