MARCKS Plasmide Double Nickase (h): sc-400837-NIC

Il substrato della proteina chinasi C ricco in alanina e miristoilato (MARCKS) è una proteina legata alla membrana, regolata dalla PKC e capace di legare l’actina, che coordina il rimodellamento del citoscheletro, il traffico di membrana e la segnalazione dei fosfoinositidi attraverso fosforilazione reversibile e legame alla calmodulina. Sequestrando e rilasciando PIP2 alla membrana plasmatica, MARCKS influenza vie che controllano la polarità cellulare, la motilità, l’endocitosi e l’esocitosi, con effetti a valle su processi collegati a MAPK e alle GTPasi della famiglia Rho. L’attività di MARCKS è frequentemente studiata nel contesto dello sviluppo neuronale e della plasticità sinaptica, così come dell’attivazione e della secrezione delle cellule immunitarie. Un’espressione o fosforilazione deregolata di MARCKS è stata associata a fenotipi migratori e invasivi alterati in modelli di cancro e a meccanismi di malattie infiammatorie e del neurosviluppo, a sostegno della sua rilevanza come nodo funzionale nelle reti di segnalazione.

MARCKS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MARCKS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MARCKS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MARCKS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MARCKS interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.