Plasmide Double Nickase (h) MARCKS: sc-400837-NIC

Le substrat de la protéine kinase C riche en alanine myristoylé (MARCKS) est une protéine associée à la membrane, régulée par la PKC, qui se lie à l’actine et coordonne le remodelage du cytosquelette, le trafic membranaire et la signalisation des phosphoinositides grâce à une phosphorylation réversible et à la liaison à la calmoduline. En séquestrant puis en relarguant le PIP2 à la membrane plasmique, MARCKS influence des voies qui contrôlent la polarité cellulaire, la motilité, l’endocytose et l’exocytose, avec des effets en aval sur des processus liés aux MAPK et aux GTPases de la famille Rho. L’activité de MARCKS est souvent étudiée dans le contexte du développement neuronal et de la plasticité synaptique, ainsi que de l’activation et de la sécrétion des cellules immunitaires. Une expression ou une phosphorylation dérégulées de MARCKS ont été associées à des phénotypes migratoires et invasifs modifiés dans des modèles de cancer, ainsi qu’à des mécanismes de maladies inflammatoires et neurodéveloppementales, ce qui étaye sa pertinence en tant que nœud fonctionnel au sein des réseaux de signalisation.

MARCKS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MARCKS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MARCKS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MARCKS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MARCKS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.