LSECtin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404538

Panoramica

CLEC4G codifica LSECtin, un recettore lectinico di tipo C espresso prevalentemente dalle cellule endoteliali sinusoidali del fegato, che si lega a specifici motivi glicani presenti su glicoproteine circolanti e su alcuni patogeni selezionati. Attraverso interazioni dipendenti dal riconoscimento dei carboidrati, LSECtin contribuisce alla sorveglianza immunitaria epatica, all’adesione cellula–cellula e alla modulazione del traffico leucocitario all’interno del microambiente del fegato. Tra le interazioni di segnalazione riportate figurano la regolazione delle vie di cattura e processamento dell’antigene e il coordinamento con altre reti di recettori lectinici e scavenger, che influenzano risposte tollerogeniche rispetto a quelle infiammatorie. Un’espressione disregolata di CLEC4G/LSECtin è stata associata ad alterazioni delle interazioni tumore–fegato e a fenotipi di evasione immunitaria, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico in studi sull’infiammazione epatica, sulla biologia delle infezioni e sui processi legati alla metastatizzazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LSECtin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CLEC4G in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CLEC4G insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CLEC4G a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LSECtin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CLEC4G per lo studio della segnalazione di LSECtin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CLEC4G critici per la funzione di LSECtin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CLEC4G per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LSECtin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LSECtin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CLEC4G. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LSECtin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LSECtin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CLEC4G per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CLEC4G definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.