LKB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400313-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LKB1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LKB1 Double Nickase Plasmid (h) e il LKB1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira STK11. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LKB1 Antibody (Ley 37D/G6): sc-32245
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LKB1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400313-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LKB1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400313-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STK11 codifica la chinasi serina/treonina LKB1, un regolatore principale dell’omeostasi energetica cellulare che attiva AMPK e una famiglia di chinasi correlate ad AMPK per coordinare metabolismo, autofagia e risposte allo stress. Attraverso queste vie, LKB1 modula la segnalazione di mTOR, la polarità cellulare e l’organizzazione epiteliale, collegando il sensing dei nutrienti al controllo della crescita. LKB1 influenza inoltre la progressione del ciclo cellulare e preserva l’architettura genomica e tissutale integrando segnali che regolano proliferazione e differenziamento. Alterazioni con perdita di funzione di STK11 sono ricorrenti nei tumori umani e sono associate a una riprogrammazione metabolica e alla deregolazione dei programmi di polarità, rendendo questo asse centrale negli studi di biologia tumorale e di regolazione degli stati cellulari.
LKB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus STK11 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di STK11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di STK11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con STK11 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.