leupaxin Plasmide Double Nickase (h): sc-405101-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- leupaxin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il leupaxin Double Nickase Plasmid (h) e il leupaxin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LPXN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: leupaxin Antibody (B-2): sc-376820
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
leupaxin Plasmide Double Nickase (h) | sc-405101-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
leupaxin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405101-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **LPXN** codifica la leupaxina, una proteina adattatrice con domini LIM della famiglia della paxillina che si localizza nelle adesioni focali e collega l’attivazione delle integrine alla segnalazione a valle. Attraverso interazioni con complessi del citoscheletro e con tirosin-chinasi, la leupaxina modula adesione cellulare, migrazione e meccanotrasduzione, influenzando il turnover delle adesioni focali e la dinamica dell’actina. La segnalazione dipendente da LPXN si interfaccia con vie quali **FAK/SRC**, la regolazione delle GTPasi della famiglia **Rho** e le cascate **MAPK**, che coordinano la motilità cellulare e i segnali di sopravvivenza. Alterazioni dell’espressione della leupaxina o un rimodellamento delle adesioni focali sono stati associati a fenotipi cellulari invasivi in oncologia e a una migrazione/traffico immunitario deregolati, rendendo **LPXN** un nodo utile per lo studio dei meccanismi di malattia legati all’adesione.
leupaxin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LPXN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LPXN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LPXN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LPXN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.