L-type Ca++ CP α1F Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416338
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- L-type Ca++ CP α1F Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico L-type Ca++ CP α1F, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: L-type Ca++ CP α1F Antibody (1H6): sc-517005
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
L-type Ca++ CP α1F Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-416338 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CACNA1F codifica la subunità α1F formante il poro di un canale del calcio di tipo L voltaggio-dipendente, che media l’ingresso di Ca2+ nelle cellule eccitabili e collega la depolarizzazione di membrana alla segnalazione intracellulare. L’attività del canale modella processi dipendenti dal calcio, inclusi la trasmissione sinaptica, il rilascio di neurotrasmettitori e l’espressione genica regolata dall’attività, attraverso vie quali la segnalazione CaM/CaMK e calcineurina–NFAT. Nella retina umana, la funzione di CACNA1F è particolarmente importante per la neurotrasmissione dai fotorecettori alle cellule bipolari e per l’elaborazione dei segnali visivi. L’alterazione genetica di CACNA1F è stata associata a patologie retiniche ereditarie e a fenotipi di neuro-sviluppo, a supporto della sua rilevanza per lo studio della biologia dei canali del Ca2+ e dei meccanismi di malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1F (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CACNA1F in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CACNA1F insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CACNA1F a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina L-type Ca++ CP α1F.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CACNA1F per lo studio della segnalazione di L-type Ca++ CP α1F, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CACNA1F critici per la funzione di L-type Ca++ CP α1F
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CACNA1F per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CACNA1F. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal L-type Ca++ CP α1F Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR L-type Ca++ CP α1F (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CACNA1F per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CACNA1F definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.