KGA Plasmide Double Nickase (h): sc-402575-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KGA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il KGA Double Nickase Plasmid (h) e il KGA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GLS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: KGA Antibody (IJ-2): sc-100533
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KGA Plasmide Double Nickase (h) | sc-402575-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KGA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402575-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLS umano codifica la glutaminasi di tipo renale (KGA), un enzima mitocondriale che idrolizza la glutammina in glutammato, fornendo carbonio e azoto per il ciclo dell’acido citrico (TCA), la biosintesi dei nucleotidi e l’equilibrio redox tramite la produzione di glutatione. L’attività di KGA collega il metabolismo della glutammina alla bioenergetica cellulare, all’anaplerosi e alle reti di segnalazione che regolano proliferazione e adattamento allo stress. Alterazioni della funzione di GLS/KGA sono state associate alla riprogrammazione metabolica osservata in modelli di cancro e alla suscettibilità a fenotipi neurologici e immuno-correlati legati alla gestione del glutammato. Lo studio di GLS supporta ricerche meccanicistiche sull’utilizzo dei nutrienti, sul metabolismo mitocondriale e sul crosstalk tra vie metaboliche che influenzano lo stress ossidativo e le decisioni di destino cellulare.
KGA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GLS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GLS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GLS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GLS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.