KDEL receptor 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426263

Panoramica

Kdelr2 codifica il recettore KDEL 2, un recettore di recupero residente nel Golgi che riconosce motivi C-terminali tipo KDEL presenti su proteine solubili del lume del RE e ne media il trasporto retrogrado dal Golgi al reticolo endoplasmatico tramite vescicole rivestite da COPI. Mantenendo la proteostasi del RE e la corretta compartimentalizzazione di chaperoni ed enzimi di ripiegamento, il recettore KDEL 2 sostiene la fedeltà della via secretoria e limita la segnalazione di stress legata al controllo qualità del RE. Questo asse di traffico interseca la regolazione della risposta alle proteine non correttamente ripiegate (UPR), la maturazione delle glicoproteine e le dinamiche di riciclo Golgi-RE che influenzano l’adattamento cellulare allo stress proteotossico. La disregolazione del trasporto RE–Golgi e della proteostasi è stata associata a neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e rimodellamento secretorio nelle cellule tumorali, rendendo Kdelr2 un nodo utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Kdelr2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Kdelr2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Kdelr2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KDEL receptor 2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Kdelr2 per lo studio della segnalazione di KDEL receptor 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Kdelr2 critici per la funzione di KDEL receptor 2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Kdelr2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KDEL receptor 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal KDEL receptor 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Kdelr2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KDEL receptor 2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR KDEL receptor 2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Kdelr2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Kdelr2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.