karyopherin β3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402071-NIC

IPO5 codifica la carioferina β3 (importina-5), un recettore del trasporto nucleare che riconosce specifici segnali di localizzazione nucleare e media l’importazione, dipendente dalla GTPasi Ran, di proteine cargo attraverso il complesso del poro nucleare. Controllando il traffico nucleo-citoplasmatico, IPO5 contribuisce a regolare programmi trascrizionali, la progressione del ciclo cellulare e vie di segnalazione associate alla differenziazione tramite la regolazione spaziale di fattori di trascrizione e proteine leganti l’RNA. Un’attività alterata delle importine e un trasporto nucleare deregolato sono caratteristiche ricorrenti nel cancro e in altri disturbi proliferativi, e IPO5 è stato collegato a una segnalazione di crescita aberrante attraverso la mislocalizzazione di proteine regolatorie. Di conseguenza, IPO5 è spesso studiato nel contesto del rimodellamento delle vie di trasporto nucleare, delle risposte allo stress e delle dipendenze genome-wide nelle cellule trasformate.

karyopherin β3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IPO5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IPO5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IPO5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IPO5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.