Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
karyopherin α2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401484-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- karyopherin α2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il karyopherin α2 Double Nickase Plasmid (h) e il karyopherin α2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KPNA2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: karyopherin α2 Antibody (B-9): sc-55538
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
karyopherin α2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401484-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
karyopherin α2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401484-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KPNA2 codifica per la carioferina alfa 2, un adattatore importina-α che riconosce i segnali classici di localizzazione nucleare e coopera con l’importina-β per mediare il trasporto nucleocitoplasmatico, regolato dalla GTPasi Ran, attraverso il complesso del poro nucleare. Controllando l’ingresso nel nucleo di fattori di trascrizione, proteine della riparazione del DNA e regolatori del ciclo cellulare, KPNA2 influenza la progressione mitotica, la stabilità del genoma e la segnalazione di risposta allo stress. Un’espressione deregolata di KPNA2 è stata associata ad alterazioni dei programmi di trasporto nucleare e a fenotipi proliferativi in molteplici contesti tumorali, rendendola un nodo utile per studiare la regolazione, dipendente dal trasporto, della segnalazione oncogenica e dei processi associati alla cromatina. La funzione di KPNA2 è rilevante anche per studi sulla dinamica dell’importazione nucleare, sulla proteostasi e sul controllo trascrizionale dipendente dal contesto.
karyopherin α2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KPNA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KPNA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KPNA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KPNA2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.