JAB1 Plasmide Double Nickase (m): sc-424107-NIC

Il gene murino Cops5 codifica JAB1 (CSN5), la subunità metalloproteasica del signalosoma COP9 che catalizza la deneddilazione delle culline per regolare l’attività delle ligasi E3 ubiquitina cullina-RING e la proteostasi. Attraverso questo ruolo, JAB1 coordina la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e gli output della trasduzione del segnale controllando il turnover e la localizzazione di proteine regolatorie chiave, inclusi i modulatori dei programmi trascrizionali di AP-1. JAB1 interagisce inoltre con vie che governano apoptosi, risposte allo stress e segnalazione infiammatoria, collegando la regolazione dipendente dall’ubiquitina al controllo trascrizionale specifico del contesto. Una funzione deregolata di CSN5/COP9 è stata associata a proliferazione aberrante e a stati di segnalazione alterati in molteplici modelli rilevanti per la malattia, rendendo Cops5 un bersaglio comune per studi meccanicistici sul controllo della via ubiquitina–proteasoma.

JAB1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cops5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cops5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cops5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cops5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.