IRP-1 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-401817-NIC

인간 ACO1 유전자는 철 조절 단백질 1(IRP-1)을 암호화하며, IRP-1은 세포질에 존재하는 이중 기능 단백질로서 [4Fe–4S] 클러스터를 가진 아코니테이스 효소 형태와 철 대사 조절에 관여하는 RNA 결합 조절자 형태 사이를 상호 전환합니다. 철이 제한되거나 산화 스트레스 조건에서는 IRP-1이 표적 mRNA의 철 반응 요소(IRE)에 결합하여 페리틴, 트랜스페린 수용체, 페로포틴과 같은 핵심 철 처리 유전자의 번역과 안정성을 조절함으로써, 철–황(Fe–S) 클러스터 생합성과 전사 후 유전자 조절을 연결합니다. 이러한 스위치는 헴 합성과 Fe–S 효소에 필요한 철의 가용성을 조정함으로써 세포의 산화환원 항상성, 미토콘드리아 대사, 저산소 적응 프로그램과도 통합되어 작동합니다. IRP-1/IRE 신호의 이상 조절은 빈혈 및 철 과부하, 신경퇴행, 암세포 대사 재편, 그리고 철 처리 방식이 산화 손상과 증식 능력에 영향을 미치는 염증성 스트레스 등의 맥락에서 연구되고 있습니다.

IRP-1 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 ACO1 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 ACO1 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 ACO1의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, ACO1 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.