IP3KA Plasmide Double Nickase (h): sc-404638-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IP3KA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IP3KA Double Nickase Plasmid (h) e il IP3KA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ITPKA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IP3KA Antibody (F-3): sc-271838
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IP3KA Plasmide Double Nickase (h) | sc-404638-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IP3KA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404638-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ITPKA umano codifica l’inositolo-trifosfato 3-chinasi A (IP3KA), un enzima regolato da Ca2+/calmodulina che fosforila l’inositolo 1,4,5-trifosfato (IP3) per generare IP4, contribuendo così a plasmare la dinamica della segnalazione intracellulare del calcio. Modulando il rilascio di Ca2+ dipendente da IP3 dal reticolo endoplasmatico, IP3KA influenza la funzione sinaptica, il rimodellamento del citoscheletro e programmi di segnalazione dipendenti dall’attività, inclusi i percorsi che collegano i transienti di calcio alle risposte trascrizionali. Nei neuroni, IP3KA è arricchita nelle spine dendritiche ed è stata associata a meccanismi alla base della plasticità e dell’eccitabilità attraverso la regolazione di effettori sensibili al Ca2+. L’alterazione dell’equilibrio IP3/IP4 e dell’omeostasi del calcio associata alla deregolazione di ITPKA è rilevante per la neurobiologia ed è stata anche studiata in contesti di segnalazione aberrante e fenotipi di migrazione in modelli di malattia.
IP3KA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITPKA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITPKA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITPKA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITPKA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.