Integrin αX/ITGAX/CD11c Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401765-ACT

ITGAX codifica l’integrina αX (CD11c), una subunità α che eterodimerizza con l’integrina β2 (CD18) formando il recettore del complemento 4 (CR4), un recettore chiave di adesione e fagocitosi nelle cellule della linea mieloide. CD11c media interazioni cellula–cellula e cellula–matrice, il traffico leucocitario e il riconoscimento dipendente dal complemento di bersagli opsonizzati con iC3b, integrando segnali di “inside-out” delle integrine per regolare il rimodellamento del citoscheletro e la formazione della sinapsi immunologica. Attraverso un crosstalk coordinato con la segnalazione dei recettori Fc e le reti di chinasi a valle, ITGAX influenza l’acquisizione dell’antigene, la maturazione delle cellule dendritiche e i programmi di citochine infiammatorie. Un’espressione deregolata di ITGAX o l’abbondanza di cellule CD11c+ è spesso utilizzata per stratificare l’infiltrazione immunitaria e gli stati di attivazione mieloide in ambito oncologico, nell’infiammazione autoimmune e nelle infezioni croniche, supportando studi meccanicistici sulla biologia delle malattie guidate dal comparto mieloide.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGAX senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGAX nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGAX, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin αX/ITGAX/CD11c. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGAX nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin αX/ITGAX/CD11c nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin αX/ITGAX/CD11c nelle cellule tumorali con espressione di ITGAX silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.