IL-8RB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401404-ACT

CXCR2 codifica il recettore beta dell’interleuchina-8 (IL-8RB), un GPCR a sette domini transmembrana che lega chemochine CXC ELR+ come CXCL8/IL-8 per guidare la chemiotassi, l’adesione e l’attivazione dei neutrofili e di altre cellule mieloidi. Il legame al recettore innesca una segnalazione dipendente da Gαi che modula il flusso intracellulare di calcio e attiva le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e NF-κB, plasmando l’espressione genica infiammatoria e il rimodellamento del citoscheletro. La segnalazione di CXCR2 coordina il traffico leucocitario, segnali angiogenici e le risposte tissutali al danno; un’attività deregolata dei recettori per le chemochine è implicata nell’infiammazione cronica e nel reclutamento di cellule immunitarie associato ai tumori. Di conseguenza, CXCR2/IL-8RB è ampiamente studiato in modelli di microambienti infiammatori, biologia delle cellule mieloidi e migrazione cellulare guidata da chemochine.

IL-8RB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CXCR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-8RB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CXCR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CXCR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-8RB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CXCR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-8RB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-8RB nelle cellule tumorali con espressione di CXCR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.