IL-1 beta/IL1B Plasmide Double Nickase (h): sc-400078-NIC

L’IL1B umano codifica l’interleuchina-1 beta (IL-1β), una potente citochina pro-infiammatoria prodotta come precursore inattivo e maturata proteoliticamente a valle dell’attivazione dell’inflammasoma e dell’attività della caspasi-1. La segnalazione di IL-1β attraverso IL-1R1 e proteine accessorie attiva cascate dipendenti da MyD88, incluse le vie di NF-κB e MAPK, inducendo citochine secondarie, chemochine e molecole di adesione che coordinano le risposte immunitarie innate. IL1B è strettamente associato al reclutamento di cellule infiammatorie, alla risposta febbrile e al rimodellamento tissutale; una sua espressione disregolata è collegata a patobiologia infiammatoria cronica e autoimmune. In quanto nodo centrale nelle reti citochiniche, IL1B è ampiamente studiato nella biologia dei macrofagi, nella segnalazione dell’inflammasoma e in modelli di infiammazione sterile e di attivazione immunitaria indotta da infezioni.

IL-1 beta/IL1B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IL1B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IL1B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IL1B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IL1B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.