IFN-γRα Plasmide Double Nickase (h): sc-401191-NIC

IFNGR1 codifica la catena alfa del recettore dell’interferone gamma (IFN-γRα), la subunità che lega il ligando del complesso recettoriale per IFN-γ e che avvia segnali antimicrobici e immunomodulatori in risposta a IFN-γ. In seguito al legame con il recettore, le chinasi associate JAK1/JAK2 fosforilano STAT1, attivando programmi trascrizionali che controllano la presentazione dell’antigene, l’attivazione dei macrofagi e la regolazione delle risposte immunitarie di tipo Th1. Questo asse interagisce con i meccanismi di riconoscimento dell’immunità innata e con le reti infiammatorie, influenzando l’espressione dei geni stimolati dall’interferone e di regolatori di feedback come le proteine SOCS. La deregolazione o la perdita della funzione di IFNGR1 è associata a una ridotta risposta a IFN-γ e a fenotipi di difesa dell’ospite alterati, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio dei difetti di segnalazione immunitaria e dei meccanismi delle malattie infiammatorie nelle cellule umane.

IFN-γRα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IFNGR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IFNGR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IFNGR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IFNGR1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.