IFN-α/βRβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421048

Panoramica

Ifnar2 codifica la subunità del recettore murino per l’interferone α/β IFN-α/βRβ (IFNAR2), un componente fondamentale del complesso recettoriale per gli interferoni di tipo I che collega il legame extracellulare di IFN-α/β alla segnalazione intracellulare JAK–STAT. Dopo l’attivazione del recettore, IFNAR2 coopera con IFNAR1 per attivare TYK2 e JAK1, promuovendo la fosforilazione di STAT1/STAT2 e la formazione di ISGF3, che induce i geni stimolati dall’interferone responsabili della regolazione della difesa antivirale, della presentazione dell’antigene e della programmazione delle cellule dell’immunità innata. Questa via modula le soglie infiammatorie e il dialogo con le vie di segnalazione NF-κB e MAPK, influenzando le reti citochiniche e l’omeostasi immunitaria. Una segnalazione dipendente da IFNAR2 deregolata è stata implicata in patologie immuno-mediate e in una suscettibilità alterata a infezioni e infiammazione, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici in immunologia e nella biologia ospite–patogeno.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α/βRβ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ifnar2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ifnar2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ifnar2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IFN-α/βRβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ifnar2 per lo studio della segnalazione di IFN-α/βRβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ifnar2 critici per la funzione di IFN-α/βRβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ifnar2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IFN-α/βRβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IFN-α/βRβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ifnar2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IFN-α/βRβ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IFN-α/βRβ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ifnar2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ifnar2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.