IFITM1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416878-ACT

La proteina transmembrana indotta dall’interferone 1 (IFITM1) è un piccolo gene stimolato dall’interferone associato alla membrana che modula la segnalazione dell’immunità innata e limita l’ingresso e la replicazione di diversi virus con envelope alterando le proprietà di membrana e il traffico endosomiale. La sua espressione viene indotta a valle delle vie dell’interferone di tipo I/II tramite la segnalazione JAK–STAT e contribuisce ai programmi cellulari di stato antivirale e alle interazioni immuno-epiteliali. IFITM1 partecipa inoltre a processi legati all’adesione cellulare, alla proliferazione e alle risposte allo stress, collegando la segnalazione dell’interferone a reti più ampie di rimodellamento trascrizionale e di membrana. Un’espressione deregolata di IFITM1 è stata riportata in contesti infiammatori e in molteplici tumori, rendendola un marcatore utile e un nodo funzionale per studi sulle interazioni ospite–patogeno e sulle risposte all’interferone associate al tumore.

IFITM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFITM1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFITM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFITM1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFITM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFITM1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFITM1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFITM1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFITM1 nelle cellule tumorali con espressione di IFITM1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.