Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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HRI Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420950
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HRI Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HRI, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HRI Antibody (D-12): sc-365239
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HRI Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420950 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Eif2ak1 codifica l’inibitore regolato dall’eme (HRI), una chinasi di eIF2α sensibile allo stress che fosforila EIF2S1 per attenuare la traduzione globale, promuovendo al contempo la traduzione selettiva di trascritti adattativi allo stress. Nelle cellule murine, HRI collega la disponibilità di eme, lo stress ossidativo e lo stress proteotossico alla risposta integrata allo stress, coordinando proteostasi, equilibrio redox e omeostasi mitocondriale. Questo asse di segnalazione interagisce con le vie che controllano la biosintesi dell’eme e il metabolismo del ferro, e modula programmi infiammatori e apoptotici in condizioni di stress cellulare. La deregolazione del controllo traduttivo dipendente da HRI è rilevante in modelli di anemia ed emoglobinopatie, neurodegenerazione e fenotipi metabolici o infiammatori indotti dallo stress, in cui l’omeostasi della sintesi proteica risulta alterata.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HRI (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eif2ak1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eif2ak1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eif2ak1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HRI.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eif2ak1 per lo studio della segnalazione di HRI, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Eif2ak1 critici per la funzione di HRI
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eif2ak1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HRI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HRI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eif2ak1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HRI Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HRI (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eif2ak1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eif2ak1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.