hnRNP A2/B1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424702-ACT

Hnrnpa2b1 del topo codifica la proteina legante l’RNA hnRNP A2/B1, un componente centrale dei complessi delle ribonucleoproteine nucleari eterogenee che coordina lo splicing del pre‑mRNA, l’esportazione dell’mRNA, la stabilità e la traduzione. hnRNP A2/B1 partecipa alla regolazione genica co- e post-trascrizionale attraverso interazioni con fattori dello spliceosoma e tramite l’accoppiamento tra trascrizione e processamento dell’RNA, influenzando programmi di stato cellulare quali proliferazione e differenziamento. È stata inoltre implicata nella biologia dei granuli di RNA e nelle risposte allo stress, collegando il metabolismo dell’RNA alla proteostasi e alla compartimentalizzazione subcellulare. La disregolazione del processamento dell’RNA dipendente da hnRNP A2/B1 e della selezione delle isoforme è spesso studiata in contesti di neurodegenerazione, riprogrammazione oncogenica e segnalazione infiammatoria, in cui un’alterata regolazione dell’RNA contribuisce a fenotipi associati alla malattia.

hnRNP A2/B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Hnrnpa2b1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hnRNP A2/B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Hnrnpa2b1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Hnrnpa2b1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hnRNP A2/B1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Hnrnpa2b1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hnRNP A2/B1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hnRNP A2/B1 nelle cellule tumorali con espressione di Hnrnpa2b1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.