HLA-E Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403124-LAC

HLA-E codifica una molecola MHC di classe I non classica che presenta un repertorio peptidico ristretto, inclusi peptidi della sequenza leader provenienti da altre proteine HLA di classe I, per regolare la sorveglianza immunitaria. Interagendo con recettori inibitori e attivatori come NKG2A/CD94 e NKG2C/CD94 sulle cellule natural killer e su sottopopolazioni di linfociti T, HLA-E modula la citotossicità, la produzione di citochine e la tolleranza a livello della superficie cellulare. La sua espressione e il caricamento dei peptidi sono collegati alle vie di processamento e presentazione dell’antigene che coinvolgono TAP e il complesso di caricamento dei peptidi nel reticolo endoplasmatico. Un’alterata abbondanza di HLA-E o una presentazione peptidica disfunzionale vengono studiate in contesti di infezione, infiammazione, evasione immunitaria tumorale e immunobiologia dei trapianti, in cui la segnalazione dei checkpoint delle cellule NK influenza gli esiti immunitari.

Le particelle di attivazione lentivirale HLA-E (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HLA-E in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HLA-E (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-E, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HLA-E. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HLA-E e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.