HECTD1 Plasmide Double Nickase (m): sc-431500-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HECTD1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HECTD1 Double Nickase Plasmid (m) e il HECTD1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Hectd1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HECTD1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431500-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HECTD1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431500-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Hectd1 codifica HECTD1, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo HECT che promuove, nelle cellule di topo, la regolazione ubiquitina-dipendente della stabilità delle proteine e dell’output di segnalazione. Attraverso l’ubiquitinazione dei substrati, HECTD1 contribuisce al controllo della proteostasi e modula vie collegate alla polarità cellulare, alla dinamica del citoscheletro e alla segnalazione responsiva allo stress, che plasmano i programmi di proliferazione e differenziamento. Studi genetici e funzionali hanno collegato un’attività alterata di HECTD1 a difetti nello sviluppo embrionale e nella morfogenesi dei tessuti, evidenziandone la rilevanza per la biologia dello sviluppo e per i meccanismi alla base di fenotipi congeniti. In quanto nodo del sistema ubiquitina–proteasoma, HECTD1 è spesso studiata per la sua influenza sul crosstalk tra vie di segnalazione e sul rimodellamento, dipendente dal contesto, delle reti di segnalazione cellulare.
HECTD1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hectd1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hectd1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hectd1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hectd1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.