Hbb-b2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420803

Panoramica

Il gene murino Hbb-b2 codifica una subunità della beta-globina che si assembla con l’alfa-globina per formare l’emoglobina, il trasportatore di ossigeno degli eritrociti essenziale per la distribuzione sistemica dell’ossigeno e il trasporto di anidride carbonica. La sua espressione è strettamente coordinata durante l’eritropoiesi attraverso programmi trascrizionali eritroidi e la regolazione del locus delle globine, supportando la maturazione dei globuli rossi e la stabilità del tetramero di emoglobina. Variazioni nel dosaggio o nella sequenza della beta-globina possono alterare la funzione dell’emoglobina e la fisiologia dei globuli rossi, rendendo Hbb-b2 un gene modello utile per studiare le emoglobinopatie e i meccanismi legati all’anemia. Come parte della rete delle globine, Hbb-b2 fornisce un readout maneggevole per le vie che controllano la differenziazione eritroide, la gestione dello stress ossidativo e la biologia responsiva all’ipossia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hbb-b2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hbb-b2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hbb-b2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hbb-b2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hbb-b2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hbb-b2 per lo studio della segnalazione di Hbb-b2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hbb-b2 critici per la funzione di Hbb-b2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hbb-b2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hbb-b2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Hbb-b2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hbb-b2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hbb-b2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Hbb-b2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hbb-b2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hbb-b2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.