H2BFWT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407111

Panoramica

H2BFWT codifica un membro umano della famiglia dell’istone H2B che partecipa all’organizzazione dei nucleosomi e all’architettura della cromatina di ordine superiore, influenzando così l’accessibilità del genoma ai processi di trascrizione, replicazione e riparazione del DNA. In quanto componente fondamentale della cromatina, H2BFWT contribuisce a coordinare la regolazione epigenetica e processi dipendenti dalla cromatina come la progressione del ciclo cellulare e il mantenimento della stabilità genomica. Alterazioni del dosaggio istonico o della composizione della cromatina sono spesso associate a programmi di espressione genica deregolati e possono modulare vie implicate nell’oncogenesi e nelle anomalie dello sviluppo. Di conseguenza, H2BFWT è rilevante per studi sulla dinamica della cromatina, sul controllo trascrizionale e sulle risposte al danno del DNA nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO H2BFWT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene H2BFWT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del H2BFWT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto H2BFWT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina H2BFWT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di H2BFWT per lo studio della segnalazione di H2BFWT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni H2BFWT critici per la funzione di H2BFWT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di H2BFWT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal H2BFWT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal H2BFWT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus H2BFWT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal H2BFWT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR H2BFWT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia H2BFWT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio H2BFWT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.