G_{α 11} CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401653-ACT

GNA11 kodiert die humane heterotrimere G‑Protein‑α‑Untereinheit Gα11, einen zentralen Vermittler von Signalen aus Gq/11‑gekoppelten GPCRs zu nachgeschalteten Effektorwegen. Nach Rezeptoraktivierung stimuliert Gα11 die Phospholipase C‑β und fördert dadurch die Bildung von IP3/DAG, die Mobilisierung von intrazellulärem Ca2+ sowie die Aktivierung der Proteinkinase C; nachgeschaltete Effekte betreffen MAPK/ERK und Transkriptionsprogramme, die Proliferation, Sekretion und Differenzierung steuern. Die GNA11‑Signalgebung trägt zur Regulation des Gefäßtonus, der endokrinen Funktion und der neuronalen Erregbarkeit bei; eine Dysregulation dieser Achse wurde in verschiedenen Krankheitskontexten mit onkogener Signalgebung und einer veränderten Kontrolle von Zellzuständen in Verbindung gebracht. Als proximale Schaltstelle der GPCR‑Signaltransduktion wird Gα11 häufig untersucht, um Pathway‑Bias, calciumabhängige Antworten und das Crosstalk mit Wachstumsfaktor‑Signalgebung zu analysieren.

Gα 11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GNA11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Gα 11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GNA11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GNA11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Gα 11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GNA11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Gα 11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Gα 11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GNA11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.