Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GSS Plasmide Double Nickase (h): sc-402992-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GSS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GSS Double Nickase Plasmid (h) e il GSS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GSS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GSS Antibody (H-7): sc-166882
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GSS Plasmide Double Nickase (h) | sc-402992-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402992-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La glutatione sintetasi (GSS) codifica un enzima ATP-dipendente che catalizza l’ultimo passaggio della biosintesi del glutatione, legando la glicina alla γ-glutamilcisteina per produrre glutatione ridotto (GSH). Controllando i pool intracellulari di GSH, GSS sostiene l’omeostasi redox cellulare, la detossificazione di composti elettrofili e il mantenimento della segnalazione dipendente dai tioli in condizioni di stress ossidativo. L’attività di GSS si intreccia con il metabolismo del glutatione e con reti più ampie di difesa antiossidante che influenzano la funzione mitocondriale, la S-glutationilazione delle proteine e le risposte agli xenobiotici. Alterazioni della funzione di GSS sono state associate a errori congeniti della biosintesi del glutatione e a fenotipi legati a un aumento del danno ossidativo, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla sensibilità allo stress e sulla vulnerabilità metabolica.
GSS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.