GRIN1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405452-ACT

GPRIN1 (induttore 1 della crescita dei neuriti regolato da proteine G) codifica una proteina arricchita nei neuroni, implicata nell’estensione dei neuriti, nella dinamica del cono di crescita e nella maturazione sinaptica attraverso la modulazione della segnalazione mediata da recettori accoppiati a proteine G e del rimodellamento del citoscheletro. I processi associati a GPRIN1 si intersecano con i programmi di differenziamento neuronale e con vie dipendenti dall’attività che modellano connettività e plasticità. Un’espressione deregolata o perturbazioni di rete che coinvolgono GPRIN1 sono state esplorate nel contesto della biologia delle malattie neuroevolutive e neuropsichiatriche, in cui alterazioni della neuritogenesi e della funzione sinaptica sono temi ricorrenti. In quanto effettore della segnalazione neuronale umana, GPRIN1 rappresenta un bersaglio gestibile per studi meccanicistici di fenotipi legati alla connettività in modelli cellulari pertinenti.

GRIN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GPRIN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GRIN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GPRIN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GPRIN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GRIN1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GPRIN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GRIN1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GRIN1 nelle cellule tumorali con espressione di GPRIN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.