GPR50 Plasmide Double Nickase (h): sc-402934-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR50 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR50 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR50 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR50. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR50 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR50 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR50 codifica un recettore orfano accoppiato a proteina G (GPCR), strutturalmente correlato ai recettori della melatonina ma considerato non canonico nella trasduzione del segnale, con ruoli rilevanti nella regolazione neuroendocrina e nella biologia associata ai ritmi circadiani. Può influenzare la responsività cellulare alle vie della melatonina attraverso interazioni recettore–recettore e tramite la modulazione del traffico dei GPCR e della loro competenza di segnalazione, con effetti sui processi a valle legati al cAMP e sui programmi trascrizionali. I pattern di espressione e le varianti genetiche di GPR50 sono stati associati a fenotipi metabolici e a tratti neuropsichiatrici, a supporto della sua rilevanza negli studi su bilancio energetico, regolazione dell’umore e funzione ipotalamica. In quanto recettore di membrana con espressione sbilanciata a seconda del tessuto, GPR50 è anche utile per analizzare il crosstalk tra reti di GPCR e gli output di segnalazione dipendenti dal contesto in modelli cellulari umani.
GPR50 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR50 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR50. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR50. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR50 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.