GPR38 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406289

Panoramica

Il recettore della motilina (MLNR), noto anche come GPR38, è un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) di classe A che lega l’ormone peptidico motilina per coordinare la motilità gastrointestinale interdigestiva e regolare la contrattilità della muscolatura liscia. Una volta attivato, GPR38 interagisce con proteine G eterotrimeriche influenzando la segnalazione dei secondi messaggeri, inclusa la mobilizzazione del calcio e le vie chinasi a valle che modulano l’eccitabilità dei circuiti enterici e gastrici. L’espressione e la segnalazione di MLNR vengono utilizzate per studiare i meccanismi che controllano i complessi motori migranti, lo svuotamento gastrico e la comunicazione neuroendocrina nell’intestino. L’attività deregolata del recettore della motilina è stata investigata nel contesto dei disturbi gastrointestinali funzionali e di fenotipi di motilità intestinale alterata, rendendo MLNR un bersaglio rilevante per studi incentrati sulle vie di segnalazione in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR38 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MLNR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MLNR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MLNR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR38.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MLNR per lo studio della segnalazione di GPR38, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MLNR critici per la funzione di GPR38
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MLNR per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR38 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR38 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MLNR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR38 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR38 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MLNR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MLNR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.