GPR38 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406289

概要

モチリン受容体（MLNR。GPR38とも呼ばれる）は、ペプチドホルモンであるモチリンに結合し、消化管の空腹期運動を協調させるとともに、平滑筋の収縮性を調節するクラスAのGタンパク質共役受容体（GPCR）です。活性化されると、GPR38はヘテロ三量体Gタンパク質を介して、カルシウム動員や下流のキナーゼ経路などを含むセカンドメッセンジャーシグナル伝達に影響を与え、腸管神経系および胃の回路における興奮性を形成します。MLNRの発現とシグナル伝達は、移動性収縮複合（MMC）、胃排出、ならびに腸管内の神経内分泌コミュニケーションを制御する機構を解明するために利用されています。モチリン受容体活性の異常は、機能性消化管障害や腸管運動表現型の変化との関連で研究されており、MLNRはヒト細胞モデルにおける経路中心の研究に適した重要な標的です。

GPR38 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMLNR遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MLNR内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MLNRのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPR38タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPR38シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MLNR欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPR38の機能に不可欠なMLNRエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MLNRゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPR38 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPR38 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MLNR遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPR38 HDRプラスミド（h）および GPR38 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMLNRホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMLNR標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。