GIPC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402863-ACT

O gene humano GIPC1 codifica a proteína GIPC (proteína que interage com GAIP, extremidade C), um adaptador contendo domínio PDZ que se liga a motivos C-terminais de diversos receptores transmembrana e componentes do tráfego intracelular para coordenar endocitose, reciclagem e compartimentalização de sinais. A GIPC conecta complexos de receptores ao citoesqueleto de actina e à maquinaria motora por meio de interações com proteínas como a miosina VI, moldando a disponibilidade dos receptores e os desfechos de sinalização a jusante. Por meio dessas funções de ancoragem (scaffold), a GIPC1 tem sido implicada em vias que regulam adesão celular, migração e a dinâmica de sinalização de receptores de fatores de crescimento. A expressão desregulada de GIPC1 ou alterações em redes de tráfego centradas na GIPC têm sido associadas a fenótipos relevantes para sinalização oncogênica, comportamento invasivo e outros distúrbios nos quais a renovação de receptores e o controle espacial da sinalização estão perturbados.

GIPC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GIPC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GIPC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GIPC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GIPC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GIPC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GIPC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GIPC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GIPC em células tumorais com expressão de GIPC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.