GEN1 Plasmide Double Nickase (h): sc-410437-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GEN1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GEN1 Double Nickase Plasmid (h) e il GEN1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GEN1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GEN1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410437-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GEN1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410437-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GEN1 codifica un’endonucleasi specifica per la struttura che risolve le giunzioni di Holliday e altri intermedi della ricombinazione durante la ricombinazione omologa, favorendo il completamento della riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA e la corretta segregazione dei cromosomi. Opera in vie di mantenimento del genoma che si interfacciano con la riparazione associata alla replicazione, la segnalazione dei checkpoint e il ripristino di forcelle di replicazione bloccate o collassate. L’alterazione dell’attività di GEN1 può aumentare l’instabilità cromosomica e la formazione di micronuclei, collegando una risoluzione difettosa delle giunzioni all’aumento del carico mutazionale nei tessuti proliferativi. Di conseguenza, GEN1 è spesso studiato nel contesto dell’organizzazione delle reti di riparazione del DNA, delle risposte allo stress replicativo e dei meccanismi che modellano i riarrangiamenti genomici associati al cancro.
GEN1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GEN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GEN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GEN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GEN1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.