GART Plasmide Double Nickase (h): sc-403800-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GART Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GART Double Nickase Plasmid (h) e il GART Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GART. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GART Antibody (D-4): sc-166379
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GART Plasmide Double Nickase (h) | sc-403800-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GART Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403800-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GART** codifica un enzima trifunzionale che catalizza passaggi chiave della via di biosintesi *de novo* delle purine, sostenendo la produzione di inosina monofosfato e, a valle, dei nucleotidi dell’adenina e della guanina. Controllando la disponibilità di nucleotidi, GART influenza la sintesi di DNA e RNA, la segnalazione dipendente da ATP/GTP e il metabolismo a un carbonio attraverso reazioni collegate ai folati. L’attività di GART è strettamente accoppiata alle esigenze proliferative e a programmi metabolici più ampi che coordinano il flusso biosintetico con la progressione del ciclo cellulare. Alterazioni del metabolismo delle purine e del dosaggio genico al locus **GART** sono state associate a disregolazione metabolica e a fenotipi neurosviluppativi, rendendo GART un bersaglio rilevante per studi meccanicistici dell’omeostasi dei nucleotidi.
GART Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GART nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GART. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GART. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GART interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.