Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
FX Plasmide Double Nickase (h): sc-408777-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FX Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FX Double Nickase Plasmid (h) e il FX Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TSTA3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FX Antibody (43.1): sc-100531
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FX Plasmide Double Nickase (h) | sc-408777-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FX Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408777-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TSTA3 codifica la GDP-L-fucosio sintasi (FX), un enzima citosolico che catalizza le fasi finali della via biosintetica de novo del GDP-fucosio a partire dal GDP-mannosio. Controllando la disponibilità intracellulare di GDP-fucosio, FX sostiene la fucosilazione dei glicani su proteine di superficie cellulare e secrete, influenzando il ripiegamento proteico, le interazioni recettore–ligando e la comunicazione con la matrice extracellulare. Un’alterata fucosilazione è associata a cambiamenti nell’adesione e nella segnalazione cellulare, con rilevanza per la modulazione immunitaria, l’infiammazione e il rimodellamento dei glicani associato ai tumori. La perdita di funzione o la disregolazione di TSTA3 può quindi compromettere vie dipendenti dalla glicosilazione che modellano lo sviluppo e fenotipi cellulari legati alla malattia.
FX Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TSTA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TSTA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TSTA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TSTA3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.