FucT-l Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420423

Panoramica

Fut1 codifica la α(1,2)fucosiltransferasi 1 (FucT-1), una glicosiltransferasi residente nel Golgi che trasferisce il fucosio dal GDP-fucosio ai residui terminali di galattosio, generando glicani α1,2-fucosilati come gli antigeni di tipo H su glicoproteine e glicolipidi. Questo passaggio enzimatico è una componente fondamentale della maturazione di glicosfingolipidi e glicoproteine e modella i pattern di carboidrati sulla superficie cellulare, influenzando il legame delle lectine, l’organizzazione della membrana e il riconoscimento intercellulare. La fucosilazione dipendente da Fut1 interseca vie che controllano la differenziazione epiteliale, la funzione di barriera mucosale e le interazioni ospite–microbo attraverso la modulazione dell’adesione e della segnalazione mediate dai glicani. Alterazioni della fucosilazione α1,2 sono state associate a infiammazione e disregolazione immunitaria in molteplici contesti, rendendo Fut1 un nodo utile per studi meccanicistici di fenotipi dipendenti dai glicani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FucT-l (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fut1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fut1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fut1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FucT-l.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fut1 per lo studio della segnalazione di FucT-l, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fut1 critici per la funzione di FucT-l
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fut1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FucT-l CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FucT-l CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fut1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FucT-l Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FucT-l (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fut1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fut1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.