FNDC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413674-ACT

FNDC1 (fibronectin type III domain containing 1) codifica una proteina citoplasmatica caratterizzata da motivi simili ai domini di tipo III della fibronectina, ed è implicata nella regolazione dell’adesione cellulare, dell’organizzazione del citoscheletro e della trasduzione del segnale. Le associazioni funzionali riportate collegano FNDC1 a processi quali migrazione e proliferazione attraverso vie responsivi ai fattori di crescita, incluse le segnalazioni PI3K/AKT e MAPK, nonché alla modulazione delle risposte cellulari allo stress. Un’espressione alterata di FNDC1 è stata osservata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, supportandone l’impiego come bersaglio di ricerca per studiare il rimodellamento delle vie di segnalazione e la plasticità fenotipica. L’analisi sperimentale di FNDC1 può aiutare a definire come i segnali extracellulari vengano integrati nei programmi trascrizionali e citoscheletrici nelle cellule umane.

FNDC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FNDC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FNDC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FNDC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FNDC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FNDC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FNDC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FNDC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FNDC1 nelle cellule tumorali con espressione di FNDC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.