Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Flt-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400684
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Flt-4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Flt-4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Flt-4 Antibody (E-3): sc-514825
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Flt-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400684 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
FLT4 codifica la tirosin-chinasi recettoriale Flt-4 (VEGFR-3), uno dei principali mediatori della segnalazione linfangiogenica a valle di VEGFC e VEGFD. L’attivazione dipendente dal ligando innesca l’autofosforilazione e coinvolge le vie PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLCγ e percorsi correlati che regolano la sopravvivenza e la migrazione delle cellule endoteliali, nonché il patterning dei vasi linfatici. L’attività di Flt-4 contribuisce allo sviluppo vascolare e linfatico ed è spesso studiata nel contesto della linfangiogenesi associata ai tumori, della disseminazione metastatica e del rimodellamento infiammatorio. Una segnalazione di FLT4 disregolata è stata inoltre collegata a patologie linfatiche ereditarie, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella biologia vascolare e nei modelli di malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Flt-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FLT4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FLT4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FLT4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Flt-4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FLT4 per lo studio della segnalazione di Flt-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni FLT4 critici per la funzione di Flt-4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FLT4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Flt-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Flt-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FLT4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Flt-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Flt-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FLT4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FLT4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.