FKBPL Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410504-ACT

FKBPL (FK506 binding protein like) codifica un co-chaperone correlato alle immunofiline che si associa ai complessi HSP90 e contribuisce alla proteostasi e alla segnalazione dei recettori steroidei. È stato collegato alla regolazione della progressione del ciclo cellulare, alle risposte allo stress cellulare e alla modulazione della stabilità proteica in vie che influenzano proliferazione e differenziamento. Nelle cellule umane, l’attività di FKBPL è stata studiata in contesti che coinvolgono la segnalazione angiogenica e stimoli infiammatori, con connessioni riportate alla biologia tumorale e al rimodellamento vascolare. Un’alterata espressione di FKBPL è stata osservata in diversi modelli rilevanti per la malattia, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico in studi sull’adattamento della segnalazione e sulla regolazione del microambiente.

FKBPL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FKBPL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FKBPL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FKBPL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FKBPL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FKBPL. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FKBPL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FKBPL nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FKBPL nelle cellule tumorali con espressione di FKBPL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.