Plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-1 (m): sc-420294

Présentation

Fbln1 code la fibuline‑1, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui s’associe aux membranes basales et aux fibres élastiques afin de réguler l’assemblage de la matrice, l’élasticité tissulaire et la signalisation cellule–matrice. La fibuline‑1 interagit avec des composants structuraux et adhésifs tels que la fibronectine, les laminines et les protéoglycanes, influençant la dynamique des adhésions focales, la migration cellulaire et la mécanotransduction. Dans les modèles murins, des altérations de l’expression de Fbln1 ou de son incorporation dans la matrice ont été associées à des défauts d’organisation vasculaire et du tissu conjonctif, ainsi qu’à des processus de remodelage pertinents pour la fibrose et les modifications stromales associées aux tumeurs. Ces fonctions font de la fibuline‑1 un point d’entrée utile pour disséquer l’homéostasie de la matrice extracellulaire et le contrôle, par le microenvironnement, des phénotypes cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fbln1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fbln1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fbln1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Fibulin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fbln1 pour l'étude de la signalisation de Fibulin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fbln1 essentiels à la fonction de Fibulin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fbln1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Fibulin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Fibulin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fbln1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Fibulin-1 plasmide HDR (m) et le Fibulin-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fbln1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fbln1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.