Fibronectin Plasmide Double Nickase (h): sc-400082-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Fibronectin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Fibronectin Double Nickase Plasmid (h) e il Fibronectin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FN1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Fibronectin Antibody (EP5): sc-8422
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Fibronectin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400082-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fibronectin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400082-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FN1 codifica la fibronectina, una glicoproteina della matrice extracellulare (ECM) ad alto peso molecolare che si assembla in reti fibrillari e fornisce siti di legame per le integrine, coordinando adesione cellulare, espansione (spreading) e migrazione. La fibronectina regola le adesioni focali e la dinamica del citoscheletro e interagisce con le vie di rimodellamento dell’ECM che coinvolgono integrine, segnalazione FAK/Src e GTPasi della famiglia Rho, contribuendo così a modellare la meccanotrasduzione e l’architettura tissutale. Per i suoi ruoli nella riparazione delle ferite, nell’angiogenesi e nelle interazioni epitelio–mesenchimali, FN1 è spesso studiato in contesti di fibrosi, stroma associato ai tumori e rimodellamento tissutale infiammatorio. Un’alterata deposizione di fibronectina e lo squilibrio tra isoforme di splicing sono associati a cambiamenti nell’invasione cellulare, nel traffico delle cellule immunitarie e nella rigidità della matrice specifica d’organo in molteplici modelli di malattia.
Fibronectin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FN1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.