Fibronectin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400082-ACT

FN1 codifica a fibronectina, uma importante glicoproteína da matriz extracelular que orquestra a adesão celular, a migração e a remodelação tecidual por meio da ligação a integrinas, colágeno e proteoglicanos de sulfato de heparano. A fibronectina participa da adesão focal e da sinalização de mecanotransdução, coordenando a dinâmica do citoesqueleto de actina e regulando vias como FAK/SRC, sinalização por GTPases Rho e a organização da matriz extracelular dirigida por TGF-β. Na biologia humana, a alteração da expressão ou deposição de FN1 está associada à reparação de feridas desregulada, fibrose, invasão de células tumorais e remodelação do microambiente estromal. Essas propriedades tornam FN1 um alvo central para estudar a montagem da matriz extracelular, a plasticidade epitélio-mesenquimal e redes de sinalização dependentes de integrinas.

Fibronectin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fibronectin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fibronectin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fibronectin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fibronectin em células tumorais com expressão de FN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.