Fibromodulin Plasmide Double Nickase (h): sc-401610-NIC

FMOD umano codifica la fibromodulina, un piccolo proteoglicano ricco di leucina della matrice extracellulare che si lega alle fibrille di collagene e modula la fibrillogenesi, l’assemblaggio della matrice e le proprietà meccaniche dei tessuti. La fibromodulina partecipa all’omeostasi del tessuto connettivo e influenza la segnalazione cellula–matrice attraverso vie legate all’interazione con le integrine, all’attività del TGF-β e ai programmi di riparazione delle ferite. Un’espressione alterata di FMOD o il rimodellamento della matrice extracellulare che coinvolge la fibromodulina sono stati associati a risposte fibrotiche e a cambiamenti stromali associati ai tumori, rendendola rilevante per studi sulla regolazione del microambiente. In quanto fattore regolatore della ECM, FMOD viene spesso analizzato in modelli di rimodellamento guidato dall’infiammazione, angiogenesi e meccanotrasduzione.

Fibromodulin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FMOD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FMOD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FMOD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FMOD interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.