Plasmide CRISPR d'Activation (h) FEZ1: sc-404727-ACT

LZTS1 (également appelé FEZ1) code un suppresseur de tumeur à motif leucine zipper qui contribue à la régulation de la progression du cycle cellulaire et au maintien de la stabilité génomique. FEZ1 a été associé à des processus liés aux microtubules et au centrosome, et peut influencer le contrôle des checkpoints et la prolifération via des interactions avec la machinerie de régulation mitotique. Une diminution de l’expression ou une perte de LZTS1 a été rapportée dans de multiples cancers humains, où elle est associée à une croissance dérégulée et à une altération du contrôle du cycle cellulaire. Ces caractéristiques font de FEZ1 un modèle utile pour étudier les voies des suppresseurs de tumeurs, la fidélité mitotique et la régulation transcriptionnelle dépendante du contexte dans les cellules humaines.

FEZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LZTS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FEZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LZTS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LZTS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FEZ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LZTS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FEZ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FEZ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LZTS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.