Ferrochelatase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402043

Panoramica

FECH codifica la ferrochelatasi umana, un enzima della membrana interna mitocondriale che catalizza l’inserimento del ferro ferroso nella protoporfirina IX per produrre eme, fase terminale della via biosintetica delle porfirine/dell’eme. Controllando la disponibilità di eme, la ferrochelatasi influenza la maturazione eritroide, la respirazione mitocondriale, l’equilibrio redox e l’assemblaggio delle emoproteine. L’alterazione dell’attività di FECH è associata all’accumulo di porfirine e a una compromessa omeostasi dell’eme, con rilevanza per la protoporfiria eritropoietica e per fenotipi più ampi di stress metabolico in cellule con elevata richiesta di eme. FECH è quindi ampiamente studiato nella biologia mitocondriale, nella gestione del ferro e nel metabolismo delle porfirine, incluse le risposte della via a perturbazioni ossidative e metaboliche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ferrochelatase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FECH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FECH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FECH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ferrochelatase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FECH per lo studio della segnalazione di Ferrochelatase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FECH critici per la funzione di Ferrochelatase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FECH per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ferrochelatase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ferrochelatase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FECH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ferrochelatase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ferrochelatase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FECH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FECH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.